מאָנקייפּאָקס ווירוס פאַקטיש צייט פּקר קיט
פּראָדוקט דעטאַילס
בדעה ניצן
עס איז געניצט פֿאַר די דיטעקשאַן פון מאָנקייפּאָקס ווירוס אין מענטש סערום אָדער ליזשאַן עקסודאַט סאַמפּאַלז דורך ניצן פאַקטיש צייט פּקר סיסטעמען.
טעסט פּרינציפּ
דער פּראָדוקט איז אַ פלורעסאַנט זאָנד-באזירט Taqman® פאַקטיש-צייט פּקר אַסיי סיסטעם.ספּעציעלע פּרימערז און פּראָבעס זענען דיזיינד פֿאַר די דיטעקשאַן פון די F3L דזשין פון מאָנקייפּאָקס ווירוס.ינערלעך קאָנטראָל טאַרגאַטינג די מענטש קאַנסערווד דזשין מאָניטאָר די מוסטער זאַמלונג, מוסטער האַנדלינג און פאַקטיש-צייט פּקר פּראָצעס צו ויסמיידן פאַלש-נעגאַטיוו רעזולטאַטן.די קיט איז אַ גאָר פּרעמיקס ליאָפיליזעד סיסטעם, וואָס ינקלודז מאַטעריאַלס דארף פֿאַר מאָנקייפּאָקס ווירוס דיטעקשאַן: נוקלעיק זויער אַמפּלאַפאַקיישאַן ענזיים, UDG ענזיים, אָפּרוף באַפער, ספּעציפיש אָנפאַנגער און זאָנד.
הויפּט אינהאַלט
די צוגעשטעלט קאַמפּאָונאַנץ זענען ליסטעד אין די טיש.
| קאַמפּאָונאַנץ | פּעקל | ינגרידיאַנט |
| מאָנקייפּאָקס ווירוסליאָפיליזעד פּרעמיקס | 8 פּאַס פּקר טובז× 6 טאַש | פּרימערס, פּראָבעס, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA פּאָלימעראַסע, UDG Enzyme |
| MPV positive קאָנטראָל | 400 μל × 1 רער | דנאַ סיקוואַנסיז מיט טאַרגעט דזשין |
| MPV נעגאַטיוו קאָנטראָל | 400 μל × 1 רער | דנאַ סיקוואַנסיז מיט מענטש דזשין אָפּשניט |
| דיסאַלווינג לייזונג | 1 מל × 1 רער | סטאַביליזער |
| סערטיפיקאַט פון קאַנפאָרמאַטי | 1 שטיק | / |
אָפּעראַציע לויפן
1. מוסטערזאַמלונג:ספּעסאַמאַנז זאָל זיין געזאמלט אין סטערילע טובז אין לויט
מיט נאָרמאַל טעכניש ספּעסאַפאַקיישאַנז.
2. רעאַגענט צוגרייטונג (רעאַגענט פּרעפּאַראַטיאָן שטח)
נעמען אויס די קאַמפּאָונאַנץ פון די קיט, וואָג זיי אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר סטאַנדביי נוצן.
3. ספּעסאַמאַנז פּראַסעסינג (ספּעקס פּראַסעסינג שטח)
3.1 נוקלעיק זויער יקסטראַקשאַן
עס איז רעקאַמענדיד צו נעמען 200μ ל פליסיק סאַמפּאַלז, positive קאָנטראָל און נעגאַטיוו קאָנטראָל פֿאַר נוקלעיק זויער יקסטראַקשאַן, לויט די קאָראַספּאַנדינג רעקווירעמענץ און פּראָוסידזשערז פון וויראַל דנאַ יקסטראַקשאַן קיץ.
3.2 ליאָפיליזעד פּודער דיזאָלווינג און מוסטער דערצו
צוגרייטן מאָנקייפּאָקס ווירוס ליאָפיליזעד פּרעמיקס לויט די נומער פון סאַמפּאַלז.איין מוסטער דאַרף איין פּקר רער מיט ליאָפיליזעד פּרעמיקס פּודער.נעגאַטיוו קאָנטראָל און positive קאָנטראָל זאָל זיין באהאנדלט ווי צוויי סאַמפּאַלז.
(1) לייג 15 μ ל דיסאַלווינג לייזונג אין יעדער פּקר רער מיט ליאָפיליזעד פּרעמיקס, און לייגן 5 μ ל יקסטראַקטיד סאַמפּאַלז / נעגאַטיוו קאָנטראָל / פּאָסיטיווע קאָנטראָל אין יעדער פּקר רער ריספּעקטיוולי.
(2) קאָווער פּקר טובז טייטלי, פליק פּקר טובז מיט האַנט ביז ליאָפיליזעד פּודער איז גאָר צעלאָזן און בלענדיד, קלייַבן די פליסיק צו די דנאָ פון פּקר טובז דורך ינסטאַנטאַניאַס נידעריק-גיכקייַט סענטריפוגיישאַן.
(3) אויב נוצן פּראָסט פאַקטיש-צייט פּקר קיילע פֿאַר דיטעקשאַן, דעמאָלט אַריבערפירן פּקר טובז גלייַך צו די אַמפּלאַפאַקיישאַן געגנט;אויב איר נוצן BTK-8 פֿאַר דיטעקשאַן, איר דאַרפֿן צו דורכפירן די פאלגענדע אַפּעריישאַנז: אַריבערפירן 10 μL פליסיק פון פּקר רער צו די אָפּרוף שפּאָן געזונט פון BTK-8.איין פּקר רער קאָראַספּאַנדז צו איין געזונט אויף די שפּאָן.בעשאַס פּיפּעטטינג אָפּעראַציע, ענשור אַז די פּיפּעטטע איז ווערטיקאַל 90 דיגריז.די אַעראָסאָל שלאַבאַן פּיפּעטטע עצות זאָל זיין געשטעלט אין די צענטער פון די געזונט מיט מעסיק קראַפט און האַלטן פּושינג די פּייפּעט ווען עס ריטשאַז דער ערשטער גאַנג (צו ויסמיידן באַבאַלז).נאָך די וועלז זענען אָנגעפילט, נעמען אַ רעאַקציע שפּאָן מעמבראַנע צו דעקן אַלע וועלז און דער שפּאָן איז טראַנספערד צו די אַמפּלאַפאַקיישאַן דיטעקשאַן געגנט.
4. PCR Amplification (דעטעקשאַן שטח)
4.1 שטעלן די פּקר טובז / אָפּרוף שפּאָן אין די אָפּרוף טאַנק און שטעלן די נעמען פון יעדער אָפּרוף געזונט אין די קאָראַספּאַנדינג סדר.
4.2 סעטטינגס פון דיטעקשאַן פלואָרעססענסע: (1) מאָנקייפּאָקס ווירוס (פאַם);(2) אינערלעכער קאָנטראָל (סיקסנומקס).
4.3 לויפן די פאלגענדע סייקלינג פּראָטאָקאָל
פּראָטאָקאָל פון ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| סטעפּס | טעמפּעראַטור | צייַט | סייקאַלז | |
| 1 | פאַר-דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 2 מינס | 1 |
| 2 | דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 10 ס | 45 |
| אַנילינג, פאַרלענגערונג, פלורעסאַנס אַקוואַזישאַן | 60℃ | 30 ס | ||
פּראָטאָקאָל פון BTK-8:
| סטעפּס | טעמפּעראַטור | צייַט | סייקאַלז | |
| 1 | פאַר-דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 2 מינס | 1 |
| 2 | דענאַטוראַטיאָן | 95℃ | 5 ס | 45 |
| אַנילינג, פאַרלענגערונג, פלורעסאַנס אַקוואַזישאַן | 60℃ | 14 ס | ||
5. רעזולטאַטן אַנאַליסיס (ביטע אָפּשיקן צו ינסטרומענט באַניצער מאַנואַל)
נאָך דער אָפּרוף, די רעזולטאַטן וועט זיין געראטעוועט אויטאָמאַטיש.דריקט "אַנאַליזירן" צו פונאַנדערקלייַבן, און די קיילע וועט אויטאָמאַטיש טייַטשן Ct וואַלועס פון יעדער מוסטער אין רעזולטאַט זייַל.די רעזולטאטן פון נעגאַטיוו און positive קאָנטראָל זאָל זיין קאַנפאָרם צו די פאלגענדע "6. קוואַליטי קאָנטראָל".
6. קוואַליטעט קאָנטראָל
6.1 נעגאַטיוו קאָנטראָל: קיין Ct אָדער Ct>40 אין FAM קאַנאַל, Ct≤40 אין CY5 קאַנאַל מיט נאָרמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג.
6.2 positive קאָנטראָל: Ct≤35 אין FAM קאַנאַל מיט נאָרמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג, Ct≤40 אין CY5 קאַנאַל מיט נאָרמאַל אַמפּלאַפאַקיישאַן ויסבייג.
6.3 דער רעזולטאַט איז גילטיק אויב אַלע די אויבן קרייטיריאַ זענען באגעגנט.אַנדערש, דער רעזולטאַט איז פאַרקריפּלט.
רעזולטאַט ינטערפּריטיישאַן
די פאלגענדע רעזולטאַטן זענען מעגלעך:
| Ct ווערט פון FAM קאַנאַל | Ct ווערט פון CY5 קאַנאַל | ינטערפּריטיישאַן | |
| 1# | קיין Ct אָדער Ct>40 | ≤40 | מאָנקייפּאָקס ווירוס נעגאַטיוו |
| 2# | ≤40 | קיין רעזולטאַטן | מאָנקייפּאָקס ווירוס positive |
| 3# | 40-45 | ≤40 | שייַעך-פּרובירן;אויב עס איז נאָך 40 ~ 45, באַריכט ווי 1 # |
| 4# | קיין Ct אָדער Ct>40 | קיין Ct אָדער Ct>40 | אומגילטיק |
נאטיץ: אויב אַ פאַרקריפּלט רעזולטאַט אַקערז, די מוסטער דאַרף זיין געזאמלט און טעסטעד ווידער.
סדר אינפֿאָרמאַציע
| פּראָדוקט נאָמען | קאַץ.ניין | גרייס | מוסטער | פּאָליצע לעבן | טראַנס.& סטאָ.טעמפּ. |
| מאָנקייפּאָקס ווירוס פאַקטיש צייט פּקר קיט | B001P-01 | 48 טעסץ / קיט | סערום / ליזשאַן עקסודאַטע | 12 חדשים | -25-15℃ |
